（一）雪旺細胞

       雪旺細胞（Schwann cell，SC）是外周神經(jīng)系統(tǒng)最主要的膠質(zhì)細胞，也是外周神經(jīng)的成髓鞘細胞；它形成髓鞘，或包裹軸突而不形成髓鞘。雪旺細胞的功能極其活躍，一旦神經(jīng)受損，它能反應(yīng)性分裂增殖，分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子，產(chǎn)生細胞外基質(zhì)和細胞粘附分子，對神經(jīng)元及其軸突起營養(yǎng)和修復作用。近年來的研究表明，雪旺細胞也能促進中樞神經(jīng)對脫髓鞘損傷的修復，如對脊髓的再生，對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)以及對隔-海馬通路再生等。

       1、材料和方法

       雪旺細胞培養(yǎng)取材于各類哺乳動物的外周神經(jīng)和背根神經(jīng)節(jié)，取孵化8-12d雞胚、出生1-3d 的小鼠或大鼠和人工流產(chǎn)的人胎兒，在無菌條件下用解剖鑷分離出神經(jīng)節(jié)，剝除神經(jīng)節(jié)被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)后用培養(yǎng)液（ 90% DMEM，10 % 胎牛血清，2mM谷氨酰胺）吹打分散成細胞懸液，先接種于玻璃培養(yǎng)瓶中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育30 min后，翻轉(zhuǎn)瓶子吸出細胞懸液，除去已貼壁的成纖維細胞，再接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養(yǎng)皿中，種植密度為0.2×105個細胞/ml，每皿2ml細胞懸液置。置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種第3 d，在培養(yǎng)皿中分別加入細胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml，以進一步去除成纖維細胞，作用48小時后更換新鮮培養(yǎng)液，以后每周換液兩次，每次更換一半新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液。

       2、雪旺細胞的生長和形態(tài)特征

       培養(yǎng)15d后可獲得較高純度的雪旺細胞，雪旺細胞呈雙極梭狀，核卵居中，相互平行排列，經(jīng)S-100免疫組織化學染色呈陽性反應(yīng)。增殖分裂的雪旺細胞可用于進一步傳代培養(yǎng)，也可進行冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

     （二）星形膠質(zhì)細胞

       星形膠質(zhì)細胞是膠質(zhì)細胞中體積最大，數(shù)量最多的一種，胞體呈星形，核大，呈卵圓形，染色質(zhì)稀少，星形膠質(zhì)細胞分兩類，一類為原漿性星形膠質(zhì)細胞（protoplasmic astrocyte），其突起短粗，分枝多。另一種為纖維性星形膠質(zhì)細胞（fibrous astrocyte），它的突起細長，分枝少。纖維性星形膠質(zhì)細胞是與少突膠質(zhì)細胞源自同一前體細胞。星形膠質(zhì)細胞具有多種功能，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元及其突起間的空隙幾乎全部由星形膠質(zhì)細胞充填，起結(jié)構(gòu)的支持作用，星形膠質(zhì)細胞的突起構(gòu)成血腦屏障，星形膠質(zhì)細胞能攝取和代謝某些神經(jīng)遞質(zhì)如γ-氨基丁酸等。

     （1）方法和結(jié)果

       選擇出生 2 d 的SD大鼠，無菌條件下分離出大腦皮層，用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)后用培養(yǎng)液（ 90% DMEM，10 % 胎牛血清，2mM谷氨酰胺）吹打分散成細胞懸液，先接種于玻璃培養(yǎng)瓶中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育30 min后，翻轉(zhuǎn)瓶子吸出細胞懸液，除去已貼壁的成纖維細胞，再接種于涂有鼠尾膠的75cm2塑料培養(yǎng)瓶中, 種植密度為1×105 個細胞/cm2，每瓶10ml細胞懸液置。置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每周換液2 次，培養(yǎng)10-14h，細胞分為兩層，下一層為I型膠質(zhì)細胞即原漿形膠質(zhì)細胞，上一層是O-2A前體細胞，根據(jù)兩類細胞貼壁能力的差異，以振蕩培養(yǎng)技術(shù)進行分選，在37℃搖床上振蕩，16 h（180r/min）O-2A前體細胞可被搖下來，搖下來的細胞種植在涂有鼠尾膠的75mcm2塑料培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)液使用20 % 胎牛血清促進O-2A前體細胞分化為II型膠質(zhì)細胞即纖維型膠質(zhì)細胞。可分裂增殖的原漿形膠質(zhì)細胞和纖維型膠質(zhì)細胞可用于進一步傳代培養(yǎng)，也可進行冷凍保存?zhèn)溆谩＜兌辱b定可用膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體（GFAP）染色確定。

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